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植物基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明書
產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)提取植物的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效、專一吸附DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的植物基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。
操作步驟： 使用前先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。 1、植物組織預(yù)處理：取新鮮植物組織（不超過(guò)100mg）或干重組織（不超過(guò)20mg），于液氮中充分研磨細(xì)粉狀，讓液氮自然揮發(fā)。 2、將研磨好的植物組織粉末迅速轉(zhuǎn)移到預(yù)先裝有400ul溶液A、20ul RNase A（10mg/ml）和5ul β-巰基乙醇的離心管中，充分顛倒混勻，室溫放置10min。 3、加入140ul溶液B，充分顛倒混勻，12000rpm離心10min，將上清轉(zhuǎn)移新離心管(約400-500ul)，注意不要吸入沉淀。 4、加入和上清相同體積的溶液C，充分顛倒混勻，再加入和溶液C相同體積的無(wú)水乙醇，此時(shí)若出現(xiàn)絮狀物，將絮狀物吹散后一起加入吸附柱中，12000rpm離心5min，棄廢液，一次加不完可分兩次加入。 注意：如果吸附柱膜呈綠色或離心時(shí)有堵塞現(xiàn)象，可向吸附柱中加入600ul無(wú)水乙醇，并適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。 5、 向吸附柱中加入600ul漂洗液(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放回收集管。
6、向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中， 12000rpm離心2min。 7、將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，否則殘余的乙醇可能會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。 8、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜*懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置1-5min，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的植物基因組DNA。 9、(可選)離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心2min。
注意事項(xiàng)：
1、組織應(yīng)盡量選取新鮮幼嫩樣本，富含多糖多酚的組織可能會(huì)提取失敗，請(qǐng)選用多糖多酚試劑盒。 2、如果試劑盒中的試劑出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中融化，不影響使用。 3、洗脫緩沖液的體積不能小于50ul，DNA產(chǎn)物應(yīng)-20℃保存。
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