鬼筆環(huán)肽-AMCA標記探針會選擇性地結(jié)合F-肌動蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是方便的探針，用于標記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白，細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗。肌動蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細胞中。 它也是高度保守的蛋白質(zhì)之一，與藻類和人類不同的物種相差不超過20％。 肌動蛋白是細胞中兩種細絲的單體亞基：微絲，細胞骨架的三個主要組分之一，以及微絲，是肌細胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動蛋白參與許多重要的細胞過程，包括肌肉收縮，細胞運動，細胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細胞器運動，細胞信號傳導(dǎo)，以及細胞連接和細胞形狀的建立和維持。

鬼筆環(huán)肽比肌動蛋白單體更緊密地結(jié)合肌動蛋白絲，導(dǎo)致肌動蛋白亞基從絲狀末端解離的速率常數(shù)降低，基本上通過防止絲解聚來穩(wěn)定肌動蛋白絲。此外，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動蛋白的ATP水解活性。鬼筆環(huán)肽在細胞中以不同濃度起作用不同。當以低濃度引入細胞質(zhì)時，鬼筆環(huán)肽將較少聚合形式的細胞質(zhì)肌動蛋白以及微絲蛋白聚集成聚集的肌動蛋白聚合物的穩(wěn)定“島"，但它不會干擾應(yīng)力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是通過用熒光類似物標記鬼筆環(huán)肽并用它們?nèi)旧拥鞍捉z用于光學(xué)顯微鏡來研究F-肌動蛋白在細胞中的分布的有用工具。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已經(jīng)證明在定位活細胞或固定細胞中的肌動蛋白絲以及在體外可視化單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率肌動蛋白研究中的重要工具。

標記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白，細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗

1.將 1 μL 的鬼筆環(huán)肽-AMCA 綴合物溶液添加到 1 mL 含 1% BSA的PBS 中。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物的未使用的儲備溶液應(yīng)等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類型可能染色不同。 應(yīng)相應(yīng)地制備鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度。

2.染色細胞：

2.1執(zhí)行甲醛固定。 在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS沖洗固定的細胞2-3次。

2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

2.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細胞，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

2.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進行，密封和成像。

在微孔板孔中制備樣品

從板中的樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽-AMCA溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細胞20至90分鐘

清洗細胞在顯微鏡下檢查樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開前短暫離心

鬼筆環(huán)肽-AMCA標記

鬼筆環(huán)肽-AMCA標記