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產(chǎn)品名稱:線粒體檸檬酸含量測試定試劑盒 微量法

產(chǎn)品型號:BC2175

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:線粒體檸檬酸含量測試定試劑盒 微量法
品牌:Solarbio | 貨號:BC2175
檢測方法 : 微量法
規(guī)格:100管/96樣

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BC2175線粒體檸檬酸含量測試定試劑盒 微量法的詳細資料:

        線粒體檸檬酸含量測試定試劑盒 微量法

測定意義:CA是線粒體三羧酸循環(huán)的*個中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強度的主要指標之一。

測定原理:CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進一步與苯肼反應,生成相應的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。

需要的儀器,耗材:可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。 

          線粒體檸檬酸含量測試定試劑盒 微量法

試劑組成和配制:酸性提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。堿性提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 6mL×1 瓶,4℃保存。試劑二:液體 2mL×1 瓶,4℃保存。試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 6mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃保存;標準液:液體 1mL×1 支,10μmol/mL 檸檬酸標準液,4℃保存。

      

線粒體中檸檬酸提取:稱 0.05~0.1g 樣品(建議稱 0.1g 樣本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃ 離心 5min;取上清另一 EP 管中,11000g/min 4℃離心 10min,棄上清(取 300μL 該上清液和 300μL 堿性提取液中和后可用于細胞質(zhì) CA 含量測定);沉淀即線粒體,向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液,充分懸浮溶解,超聲波破碎(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復 30 次),取此溶液 300μL 和 300μL 堿性提取液中和,混勻,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。測定步驟: 1、分光光度計或酶標儀預熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長到 330nm,蒸餾水調(diào)零。 2、試劑一、二和三 37℃預熱 10min。 3、樣本測定:空白管和標準管只需要各做一個。試劑名稱(μL) 空白管 標準管 測定管試劑一 60 60 60 蒸餾水 60 標準液 60 樣本 60 試劑二 20 20 20 試劑三 60 60 60 充分混勻,330nm 立即測定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2,ΔA=A2 –A1。檸檬酸含量計算:(1)按蛋白濃度計算檸檬酸含量(μmol/mg prot)=[C 標準管×(ΔA 測定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標準管-ΔA 空白管) ×V 樣]÷(V 樣÷Cpr)=10×(ΔA 測定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標準管-ΔA 空白管)÷Cpr 蛋白質(zhì)含量需要另外測定。(2)按樣本鮮重計算檸檬酸含量(μ mol/g鮮重)=[C標準管×(ΔA測定管-ΔA空白管)÷(ΔA標準管-ΔA空白管) ×V 樣]÷(W×V 樣÷V 樣總)=10×(ΔA 測定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標準管-ΔA 空白管)÷W C 標準管:標準液濃度,10μmol/mL; V 樣:加入反應體系中樣本體積:0.06mL;V 樣總:加入提取液體積:1mL;Cpr:樣品蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。注意:檢測限為 10nmol/mg prot 或 1μmol/g 鮮重。

 相關文獻:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
 

 

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