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產(chǎn)品名稱:生化法 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):BC0315

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):生化法 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD是糖酵解和TCA循環(huán)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)

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BC0315生化法 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒的詳細(xì)資料:

生化法 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱:輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名: Micro NAD(H) Kit

產(chǎn)品貨號(hào):BC0315           產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣         產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4保存或-20保存;            參考價(jià)格:1180
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:輔酶ⅠNAD(H)試劑盒|含量檢測(cè)試劑盒|輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)|微量法

簡(jiǎn)要介紹:
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號(hào):商品品牌:規(guī)格基本售價(jià):選擇規(guī)格
BC0315-100管/48樣Solarbio100管/48樣1180.00元



產(chǎn)品內(nèi)容:
酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
堿性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 1.5mL×1 支,4℃保存
試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存,用時(shí)加入 1.6mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑四:粉劑×1 支,4 ℃保存,用時(shí)加入 1.9mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑五:液體 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
試劑六:液體 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
試劑七:自備。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸餾水充分混合備用。
NAD 標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
NADH 標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.4mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
操作步驟:
一、NAD+和 NADH 的提?。?/span> 
1、血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提?。?/span> 
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min;取上清 200uL,加入等體積堿性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測(cè)。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 堿性提取液,煮沸 5min(蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測(cè)。
2、組織中 NAD+和 NADH 的提?。?/span> 
NAD+的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積堿性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測(cè)。
NADH 的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 堿性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測(cè)。
3、細(xì)胞或細(xì)菌中 NAD+和 NADH 的提?。?/span> 
NAD+的提?。菏占?500 萬細(xì)胞或細(xì)菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超聲波破碎 1min(強(qiáng)度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測(cè)。
NADH 的提取:收集 500 萬細(xì)胞或細(xì)菌,加入 0.5mL 堿性提取液,超聲波破碎 1min(強(qiáng)度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測(cè)。

二、測(cè)定步驟:
1、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀調(diào)節(jié)波長(zhǎng)570nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表(在1.5ml棕色EP管中按下表依次加樣)

試劑名稱對(duì)照管(µL)測(cè)定管(µL)NAD 或 NADH 標(biāo)準(zhǔn)管空白管
上清液1010  
標(biāo)準(zhǔn)溶液  10 
蒸餾水   10
試劑六100   
試劑一50505050
試劑二15151515
試劑三15151515
試劑四15151515
試劑五7777
充分混勻,室溫避光靜置20min
試劑六 202020
充分混勻,靜置5min后,15000rpm,25℃離心15min,棄上清,沉淀中加入:
試劑七200200200200

混勻, 570nm 下比色,讀取吸光值ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管,NAD 標(biāo)準(zhǔn)管的記為ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1=A 標(biāo)準(zhǔn)管 1-A 空白管。 NADH 標(biāo)準(zhǔn)管的記為ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2=A 標(biāo)準(zhǔn)管 2-A 空白管。空白管只需做一 到兩次。

注意事項(xiàng):
1、操作過程應(yīng)避光。不可將試劑一、二、三和四混合后再加,必須分開加。
2、反應(yīng)過程要注意避光。
3、當(dāng)吸光值大于 1 時(shí),建議稀釋后測(cè)量,計(jì)算公式中應(yīng)當(dāng)乘以稀釋倍數(shù)。

NAD+含量的計(jì)算 

  1. 血清(漿)中 NAD+含量計(jì)算

NAD+含量(nmol/mL)=ΔA 測(cè)定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1÷C 標(biāo))×V 提取÷V 血清=12.5×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1
2、組織、細(xì)菌、細(xì)胞中 NAD+含量計(jì)算
 (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
NAD+ (nmol/mg prot)=ΔA 測(cè)定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1÷C 標(biāo))×V 提取÷(V 提取×Cpr) = 1.25×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1
 (2)按樣本鮮重計(jì)算
NAD+ (nmol/g 鮮重)=ΔA 測(cè)定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1÷C 標(biāo))×V 提取÷W= 1.25×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1÷W
 (3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
NAD+ (nmol/10 4cell)=ΔA 測(cè)定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1÷C 標(biāo))×V 提取÷500=0.0025×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 1

 NADH 含量的計(jì)算

  1. 血清(漿)中 NADH 含量計(jì)算

NADH 含量(nmol/mL)=ΔA 測(cè)定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2÷C 標(biāo))×V 提取÷V 血清 =12.5×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2
2、組織中 NADH 含量計(jì)算
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
NADH (nmol/mg prot)=ΔA 測(cè)定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2÷C 標(biāo))×V 提取÷(V 樣品×Cpr) = 1.25×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2
(2)按樣本鮮重計(jì)算
NADH (nmol/g 鮮重)=ΔA 測(cè)定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2÷C 標(biāo))×V 提取÷W=1.25×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
NADH (nmol/10 4cell)=ΔA 測(cè)定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2÷C 標(biāo))×V 提取÷500=0.0025×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn) 2 C 標(biāo):NAD 或 NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,1.25nmol/mL;V 提?。杭尤胩崛∫嚎傮w積,1mL;V 血清:提取時(shí)加入的血清體積,0.1mL;W:樣本鮮重,g;500:500 萬個(gè)細(xì)胞。
 

生化法 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測(cè)試劑盒

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