本品用于分離鵝脾臟淋巴細胞。

本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

規(guī)格：4 ×200mL/kit
保存：室溫避光儲存，有效期至少2年。啟封后置4℃保存，有效期一周。
試劑盒內(nèi)容：
樣本稀釋液             200mL
細胞清洗液            200mL
淋巴細胞分離液          200mL
試劑F              200mL
說明書            1 份
一、 脾臟組織單細胞懸液的制備方法
注：A．全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。
    B．本試劑盒中不包含膠原酶，若采用酶消化法制備單細胞懸液，請用戶根據(jù)各實驗室要求另購不同類型膠原酶。
1. 剪碎法：將組織塊放入平皿后，加入少量F液及20%胎牛血清；用眼科剪將組織剪至勻漿狀，加入5mL F液及20%胎牛血清；用吸管吸取組織勻漿，用100目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾到試管內(nèi)；離心沉淀1500轉(zhuǎn)/分×3 min，再用細胞清洗液清洗3次，每次以500rpm短時低速離心除去細胞碎片，以200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過濾去細胞團塊。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為（2～5）×107個/mL。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或樣本稀釋液懸起細胞濃度為2×108~1×109個/mL的單細胞懸液備用。
2. 勻漿器法：用眼科剪將組織剪成小塊；放入70mL組織研磨器內(nèi)，加入2mLF液及20%胎牛血清；緩慢轉(zhuǎn)動研棒，研磨至勻漿；用5mLF液及20%胎牛血清沖洗研器；收集細胞懸液，經(jīng)200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過濾；離心沉淀800rpm×2min ，再用細胞清洗液洗3次，離心沉淀。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為（2～5）×107個/mL。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或樣本稀釋液懸起細胞濃度為2×108~1×109個/mL的單細胞懸液備用。
3. 酶消化法：     
A．用F液將膠原酶稀釋，終濃度為400 U/mL，至于冰浴備用。 
B．取一適當(dāng)大小培養(yǎng)皿進行操作：用鑷子夾碎動物脾臟，加入稀釋后的膠原酶，37℃消化20分鐘。 
C．以100或200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過濾，離心沉淀800prm×2min ，再用細胞清洗液洗3次，離心沉淀。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為（2～5）×107個/mL。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或樣本稀釋液懸起細胞濃度為2×108~1×109個/mL的單細胞懸液備用。
細胞計數(shù)方法:     
細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法。一般利用計數(shù)板（血球計數(shù)板）進行。既可用于分離（散）細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，也可用于對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù)。不論計數(shù)的對象如何，均須制備分散的細胞懸液。 
計數(shù)與計算過程 
1）在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)專用的蓋玻片。 
2）用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液，至蓋玻片被液體充滿為止。 
3）置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者，對于細胞團按單個細胞計數(shù)。 
4）按下式計數(shù)細胞懸液的密度： 細胞密度＝（4個大格細胞總數(shù)/4）×104個/mL×稀釋倍數(shù)
公式中乘以104 因為計數(shù)板中每一個大格的體積為：
 1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3而 1mL＝1000mm3
細胞計數(shù)要點：  
A．進行細胞計數(shù)時，要求懸液中細胞數(shù)目不低于104個/mL，如果細胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中；顯微鏡下計數(shù)時，遇到2個以上細胞組成的細胞團，應(yīng)按單個細胞計算。如果細胞團>10％，說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)

鵝脾臟淋巴細胞分離液試劑盒

鵝脾臟淋巴細胞分離液試劑盒