多酚氧化酶(PPO)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱：多酚氧化酶測(cè)定試劑盒 （微量法）
產(chǎn)品英文名：Micro Polyphenol Oxidase (PPO) Assay Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：BC0195                          產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣                   產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：1000
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：多酚氧化酶測(cè)定試劑盒|微量法|

簡(jiǎn)要介紹：
PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收。
PPO（EC1.10.3.1）主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號(hào)：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價(jià)：	選擇規(guī)格
BC0195-100管/48樣	Solarbio	100管/48樣	1000.00元

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 
PPO 主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元 酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。 PPO 能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在 410nm 有特征光吸收。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑： 
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容： 
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存，用前混勻即可；
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

操作步驟：  
一、粗酶液提取： 
1、收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲 波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取 上清，置冰上待測(cè)。
2、稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 410nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定（在 EP 管中依次加入下列試劑）  

充分混勻，5000g，常溫離心 10min，收集上清，取 200μL 微量玻璃比色皿或 96 孔板中，410nm 處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸光度，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。

PPO活性計(jì)算：  
a.用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下 
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個(gè) 酶活力單位。
PPO（U/mgprot）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.01×（A 測(cè) 定-A 對(duì)照）÷蛋白濃度（mg/mL）=200×ΔA÷蛋白濃度（mg/mL） 此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 g 組織在反應(yīng)體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力 單位。
PPO（U/g 鮮重）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.01×（A 測(cè) 定-A 對(duì)照）÷樣本鮮重（g/mL）=200×ΔA÷樣本鮮重（g/mL）
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為 一個(gè)酶活力單位。
PPO（U/104 cell）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.01×（A 測(cè) 定-A 對(duì)照）÷500=0.4×ΔA

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為一個(gè) 酶活力單位。
PPO（U/mgprot）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.005×（A 測(cè)定-A 對(duì)照）÷蛋白濃度（mg/mL）=400×ΔA÷蛋白濃度（mg/mL） 此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算： 
單位的定義：每分鐘每 g 組織在反應(yīng)體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為一個(gè) 酶活力單位。
PPO（U/g 鮮重）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.005×（A 測(cè)定-A 對(duì)照）÷樣本鮮重（g/mL）=400×ΔA÷樣本鮮重（g/mL）
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每分鐘每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為 一個(gè)酶活力單位。
PPO（U/104 cell）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.005×（A 測(cè)定-A 對(duì)照）÷500=0.8×ΔA

注意事項(xiàng)： 
不同樣本的多酚氧化酶的反應(yīng)溫度略有差別，可在 25-37℃之間進(jìn)行調(diào)節(jié)。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Effectof L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)》 作者:Beibei Li，Yang Ding，Xiuli Tang，Guoyi Wang，Shujuan Wu，Xianxian Li，Xiaofei Huang，Tongtong Qu，Jifeng Chen 期刊:Food and Bioprocess Technology 影響因子:3.032 PMID:
《MTA1 promotes the invasion and migration of pancreatic cancer cells potentially through the HIF-α/VEGF pathway》 作者:B Li, Y Ding, X Tang, G Wang, S Wu, X Li 期刊:Journal of Receptor and Signal Transduction Research. 影響因子:2.998 PMID:30396299

多酚氧化酶(PPO)活性檢測(cè)試劑盒