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產(chǎn)品名稱:線粒體異檸檬酸脫氫酶活性檢測試劑盒

產(chǎn)品型號:BC2160

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:線粒體異檸檬酸脫氫酶活性檢測試劑盒
測定意義:ICDHm(EC 1.1.1.41)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸,同時將NAD+ 還原為NADH,是三羧酸循環(huán)的限速酶之一,其催化的反應(yīng)是細胞NADH 主要來源之一。

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BC2160線粒體異檸檬酸脫氫酶活性檢測試劑盒的詳細資料:

線粒體異檸檬酸脫氫酶活性檢測試劑盒

線粒體異檸檬酸脫氫酶活性檢測試劑盒

 

線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)活性測定試劑盒說明書
分光光度法
注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
貨號:BC2160
規(guī)格:50 管/48 樣

產(chǎn)品組成:
試劑一:50mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:10mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:1mL×1 支,-20℃保存;
試劑四:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1 支,4℃保存;
試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存;
試劑七:粉劑×1 支,-20℃保存; 臨用前加入 3mL 蒸餾水充分混勻待用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
工作液的配制:臨用前把試劑五、試劑六轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解待用;用不完的試劑 4℃保存一周;

產(chǎn)品說明:
ICDHm(EC 1.1.1.41)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸,同時將 NAD+ 還原為 NADH,是三羧酸循環(huán)的限速酶之一,其催化的反應(yīng)是細胞 NADH 主要來源之一。ICDHm 催化 NAD+ 還原生成 NADH,導(dǎo)致 340nm 處光吸收上升。

需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:
一、 樣本的前處理:
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細菌或細胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 將勻漿 600g,4℃離心 5min。
3、 棄沉淀,將上清液移另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。
4、 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的 ICDHm(此步可選做)。
5、 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),用于線粒體 ICDHm 活性測定。

二、 測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 340nm 處,蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)孵育 5min。
3、在 1mL 石英比色皿中依次加入 60μL 試劑七、80μL 樣本和 1mL 工作液,混勻,立即記錄 340nm處 20s 時的吸光值 A1 和 2min20s 時的吸光值 A2,計算ΔA=A2-A1。

三、 ICDHm 活性計算
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。
ICDHm 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T=1145×ΔA÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算
單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。
ICDHm(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=231.3×ΔA÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算
單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。
ICDHm 活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.463×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,1.14×10-3 L;
ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103L / mol /cm;
d:比色皿光徑,1cm;
V 樣:加入樣本體積,0.08 mL;
V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;
T:反應(yīng)時間,2min;
Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;
W:樣本質(zhì)量,g;
500:細菌或細胞總數(shù),500 萬

相關(guān)文獻:

《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448  

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