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小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液試劑盒

本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡jia胺的混合液?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細(xì)胞與粒細(xì)胞聚集并迅速沉降；此時，淋巴細(xì)胞及其他單個核細(xì)胞仍處于分離液上層，紅細(xì)胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細(xì)胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。

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注意事項：

A．本實驗要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液復(fù)溫18-22℃。為獲得實驗結(jié)果，建議在取血后2小時內(nèi)進(jìn)行實驗，血液提取后存放時間越長細(xì)胞活性越低。

B．實驗過程中，如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。

C．you抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會影響細(xì)胞活性。應(yīng)注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。

D．實驗操作時，不可使用含粉手套、不可使用內(nèi)毒素含量過高的液體，手套中的粉末顆粒及高內(nèi)毒素會激活淋巴細(xì)胞從而降低細(xì)胞得率及活性。

E．本實驗不可使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，其帶有的靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

F．吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。吸取過多的淋巴細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。

G．如需進(jìn)行B、T細(xì)胞計數(shù)，則需血液貯藏時間不得多于10小時，否則將導(dǎo)致細(xì)胞被激活，得率降低。

H．為去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。

I．細(xì)胞純度可在步驟10后使用瑞氏染色方法確定，細(xì)胞活性可用臺盼藍(lán)處理后觀察。

J．由于各品牌離心機(jī)的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索jia的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。

參考文獻(xiàn)：
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《Immunogenicity evaluation of MS2 phage-mediated chimeric nanoparticle displaying an immunodominant B cell epitope of foot-and-mouth disease virus》 作者:Guoqiang Wang, Yunchao Liu, Hua Feng, Yumei Chen, Suzhen Yang, Qiang Wei, Juan Wang, Dongmin Liu, Gaiping Zhang 期刊:PeerJ 影響因子:2.353 PMID:29844975