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人外周血淋巴細胞分離液（FICOLL配制）產品簡介：
本產品是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細 胞的密度差異（紅細胞和粒細胞密度為1.090g/mL左右；淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090g/mL；血小板為 1.030~1.035g/mL），通過離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布，從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分 離出來。

產品指標： 密度 1.077±0.001g/mL 滲透壓 290~350mOsm/kgH2O 無菌 0.1μm 濾膜過濾

人外周血淋巴細胞分離液（FICOLL配制）保存條件：
本產品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液 或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液（當稀釋后血液體積小于3mL時，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積 分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離 液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液 上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長，在離心之前出現(xiàn)紅細胞成 團下沉屬正?，F(xiàn)象。）

3. 室溫，水平轉子500~1000g，離心20~30min （血液的體積越大所需的離心力越大，離心 時間越長，佳的分離條件需摸索，離心轉 速大不超過1200g）。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的 血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分 離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管 底部是紅細胞與粒細胞。

5. 小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心 管中， 10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層 細胞。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。

7. 重復步驟6

8. 棄上清，細胞重懸備用。

參考文獻：
《E2F1 mediates the downregulation of POLD1 in replicative senescence》 作者:Shichao Gao,Qiao Song,Jing Liu,Xiaomin Zhang,Xunming Ji,Peichang Wang 期刊:Cellular and Molecular Life Sciences 影響因子:7.014 PMID:30895337