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產(chǎn)品中心

當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心生化指標(biāo)檢測試劑盒BC0535磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒
磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介

磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒
測定意義:PFK(EC 2.7.1.11)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,負(fù)責(zé)將果糖-6-磷酸和ATP轉(zhuǎn)化為果糖-1,6二磷酸和ADP,是糖酵解過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶之一。
測定原理:PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即

產(chǎn)品型號:BC0535
更新時間:2025-07-13
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:1772
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磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒

操作步驟:

一、樣本的前處理

1、 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(10 4個)提取液體積(mL)為 500-1000: 1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或者 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5-10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

3、 血清(漿)樣品:直接檢測。

二、測定步驟:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測定(1) 在試劑二瓶中加入 17ml 試劑一和 1.13ml 蒸餾水充分溶解,置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)水浴 5 分鐘。用不完的試劑 4℃保存一周。(2) 在試劑三中加入 1ml 蒸餾水充分混勻,冰上放置備用;用不完的試劑 4℃保存一周。(3) 在試劑四中加入 1ml 蒸餾水充分混勻,冰上放置待用;用不完的試劑 4℃保存一周。(4) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μl 樣本、10μl 試劑三、10μl 試劑四和 170μl 試劑二,混勻,立即記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 10min20s 后的吸光值 A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒

PFK 活力單位的計(jì)算:用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下:

1、 血清(漿)PFK 活力的計(jì)算: 單位的定義:每毫升血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 轉(zhuǎn)化為 1nmol 果糖 -1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定義為一個酶活力單位。 PFK(U/mL)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷V 樣÷T=321×△A

2、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 PFK 活力的計(jì)算: (1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算:單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 轉(zhuǎn)化為 1nmol 果糖-1,6- 二磷酸和 1nmol ADP 定義為一個酶活力單位。 PFK(U/mg prot)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(Cpr×V 樣)÷T=321×△A ÷Cpr (2) 按樣本鮮重計(jì)算單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 轉(zhuǎn)化為 1nmol 果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定義為一個酶活力單位。 PFK(U/g 鮮重)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=321×△A ÷W (3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 轉(zhuǎn)化為 1nmol 果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定義為一個酶活力單位。 PFK(U/10 4 cell)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.642×△A V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10 -4L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×10 3L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V 樣:加入樣本體積,0.01mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,10min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL; W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下:

1 血清(漿)PFK 活力的計(jì)算: 單位的定義:每毫升血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 轉(zhuǎn)化為 1nmol 果糖 -1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定義為一個酶活力單位。 PFK(U/mL)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷V 樣÷T=642×△A 2 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 PFK 活力的計(jì)算: (4) 按樣本蛋白濃度計(jì)算:單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 轉(zhuǎn)化為 1nmol 果糖-1,6- 二磷酸和 1nmol ADP 定義為一個酶活力單位。 PFK(U/mg prot)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(Cpr×V 樣)÷T=642×△A ÷Cpr (5) 按樣本鮮重計(jì)算單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 轉(zhuǎn)化為 1nmol 果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定義為一個酶活力單位。 PFK(U/g 鮮重)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=642×△A ÷W (6) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 轉(zhuǎn)化為 1nmol 果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定義為一個酶活力單位。 PFK(U/10 4 cell)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.284×△A V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10 -4L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×10 3L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5 cm;V 樣:加入樣本體積,0.01mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,10min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度, mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒

提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存。試劑三:粉劑×1 支,4℃保存。試劑四:液體×1 支,4℃保存

 

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