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產(chǎn)品名稱:NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品型號:BC1120

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒
ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙tong酸和 CO2,以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝 的關(guān)鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物 ME 活性測定較多,已經(jīng)成為抗氧 化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將 ME

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BC1120NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒的詳細(xì)資料:

 

產(chǎn)品名稱:NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: NADP Malic Enzyme(NADP-ME) Assay Kit

產(chǎn)品貨號:BC1120         產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣         產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價(jià)格:420
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:NADP蘋果酸酶試劑盒|活性檢測試劑盒|NADP-ME活性檢測|試劑盒

簡要介紹:
ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙tong酸和 CO2,以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝 的關(guān)鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物 ME 活性測定較多,已經(jīng)成為抗氧 化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH,在 340nm 下測定 NADPH 增加速率。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體 70mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 20mL 提取液充分溶解備用;
試劑三:粉劑×2 支,4℃保存;用時(shí)每支加 1mL 雙蒸水充分溶解備用;
試劑四:粉劑×2 支,-20℃保存;用時(shí)每支加 500μL 雙蒸水充分溶解備用。
工作液:在 15mL 試劑二中加入 2mL 試劑三和 1mL 試劑四,可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。 產(chǎn)品說明:
ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙tong酸和 CO2,以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝 的關(guān)鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物 ME 活性測定較多,已經(jīng)成為抗氧 化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH,在 340nm 下測定 NADPH 增加速率。 
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑: 紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL 石英比色皿、勻漿器和蒸餾水 

操作步驟: 

  • 粗酶液提?。?

細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取 液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率 20%,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次)。8000g 4℃離心 10min, 取上清,置冰上待測。
組織:稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置 冰上待測。 血清(漿)樣品:直接檢測。

  • 測定步驟:
  • 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 340nm,蒸餾水調(diào)零。
  • 將試劑一在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)中保溫 15min 左右。
  • 操作表:
試劑名稱(μL)測定管
試劑一600
工作液270
樣本30

將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中,混勻后在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種), 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和反應(yīng) 1min 后的吸光度 A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意事項(xiàng)

  1. 若 A2-A1 大于 0.5,需將酶液用提取液稀釋,使 A2-A1 小于 0.5,可提高檢測靈敏度。
  2. 實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑三、試劑四和樣本在冰上放置,以免變性和失活。試劑一 37℃或 25℃水浴放置。
  3. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持 37℃或 25℃,取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水, 將此燒杯放入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
  4. 兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
  5. 如果ΔA<0.01,可將反應(yīng)時(shí)間延長到 5 分鐘或 10 分鐘。

 

  • NADP-ME 活性計(jì)算:
  • 組織中 NADP-ME 活力的計(jì)算:
  • 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

  1. 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-ME(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T =4823×ΔA÷W

  1. 細(xì)菌或細(xì)胞中 NADP-ME 活力的計(jì)算:
  2. 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

  1. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力 單位。
NADP-ME(U/10 4 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=9.65×ΔA。

  1. 血清中 NADP-ME 活力的計(jì)算:

單位的定義:每 mL 血清在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-ME(U/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷V 樣÷T =4823×ΔA。 V 反總:反應(yīng)體系總體積,9×10 -4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×10 3L/mol/cm;d:比色 皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.03 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間, 1min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

相關(guān)文獻(xiàn):
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu, Pengsong Li,Lei Zhang, Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809

NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒

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