West Femto ECL超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了獨(dú)特的發(fā)光底物系統(tǒng)，West Femto ECL超敏發(fā)光液是目前最靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測試劑：
(1) 具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測10～100 fg抗原;
(2) 可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作;
(3) 發(fā)光迅速，熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測;
(4) 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體。
2. 用途：用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。
3. 使用方法:
(1)執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
(2)Western Blot最后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液A和B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
(3)用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
(4)用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
(5)打開X光膠片暗盒，在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。
(6)暗房內(nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
4. 儲存：4  oC密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。
5. 安全性：無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。
6. 注意事項(xiàng)：
(1)步驟1～5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
(3)發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
(4)由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。
(5)某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
(6)使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

(7)NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應(yīng)避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%。

  備注：產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級。請以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。     

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標(biāo)題:A Valsa mali Effector Protein 1 Targets Apple (Malus domestica) Pathogenesis-Related 10 Protein to Promote Virulence

成員:Wang Weidong, Nie Jiajun, Lv Luqiong, Gong Wan, Wang Shuaile, Yang Mingming, Xu Liangsheng, Li Mingjun, Du Hongxia, Huang Lili

論文因子:5.754 發(fā)表期刊:Frontiers in Plant Science pmid:34691119

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標(biāo)題:Fucogalactan Sulfate (FS) from Laminaria japonica Regulates Lipid Metabolism in Diet-Induced Humanized Dyslipidemia Mice via an Intestinal FXR-FGF19-CYP7A1/CYP8B1 Pathway

成員:Jiangping Song, Xingyu Lu, Denghong Liu, Yuwei Zhang, Xiaoning Zhai, Liuyang Zhou, Jie Gao

論文因子:6.1 發(fā)表期刊:JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY pmid:37702045

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標(biāo)題:Overexpression of Circ_0005585 Alleviates Cerebral Ischemia Reperfusion Injury via Targeting MiR-16-5p

成員:Zhuang Y., Fan W. P., Yan H. S.

論文因子:0.7 發(fā)表期刊:BULLETIN OF EXPERIMENTAL BIOLOGY AND MEDICINE pmid:37566250

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標(biāo)題:Hepatoprotective effect of protocatechuic acid against type 2 diabetes-induced liver injury

成員:Kaixia Xu, Guang Lu, Qianjin Feng, Shuangchao Chen, Yonghui Wang

論文因子:3.889 發(fā)表期刊:PHARMACEUTICAL BIOLOGY pmid:37129023

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標(biāo)題:Inhibition of microRNA-17-5p reduces the inflammation and lipid accumulation, and up-regulates ATP-binding cassette transporterA1 in atherosclerosis

成員:Lili Tan,Limin Liu,Zhenyu Jiang,Xiaojiao Hao

論文因子:2.575 發(fā)表期刊:Journal of Pharmacological Sciences pmid:30850242

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

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