感受態(tài)細胞主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便于外源基因或載體進入感受態(tài)細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。
制作方法：
CaCl2法
1.將快速生長的大腸桿菌置于經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區(qū)域，誘導細胞成為感受態(tài)細胞
細胞膜通透性發(fā)生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復合物。
聯合其它的二價金屬離子（如Mn、Co）、DMSO或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100～1000倍。
2.此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發(fā)生劇烈擾動，并隨機出現許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復制、表達，實現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3.將轉化后的細胞在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。
電轉法
電擊法不需要預先誘導細菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉化率高能達到109~1010轉化子/ug閉環(huán)DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便于外源基因或載體進入感受態(tài)細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。
更新時間：2019-11-13
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